Определение ферментов в комбикормах

Московский Государственный Университет им. М.В. Ломоносова

Лаборатория физико-химии биотрансформации полимеров

Определение ферментативных активностейв комбикорме (Ярославский бройлер)

Отчет №1 для Промфермент

Июль 2007

Определение концентрации введенных ферментных препаратов в комбикорме.

Фотометрический метод анализа  с использованием окрашенных субстратов

Принцип метода

Определение изменения оптической плотности окрашенных полисахаридных субстратов под действием ферментных препаратов, находящихся в комбикорме.

Реактивы и материалы

• Спектрофотометр Varian Cary 100
• Лабораторная мельница со встроенными ситами IKA MF10
• Лабораторный термостатируемый микрошейкер BioSan
• Центрифуга Hettich 20R
• Микроцентрифуга Eppendorf
• Аналитические весы Ohaus 250D
• Секундомер
• Лабораторная мерная посуда
• Образец комбикорма (Ярославский бройлер), предоставлен ООО «Промфермент»
• Ксилан, окрашенный активным оранжевым
• Карбоксиметилценллюлоза, окрашенная активным оранжевым
• Реактивы для приготовления буферных растворов, класса ос.ч и ч.д.а.

Ферментные препараты

Препарат Ровабио AP Exl (Одиссео)

Схема экперимента

Приготовление запасного раствора Ровабио AP Exl

Был приготовлен запасной раствор Ровабио с концентрацией 10 мг/мл. Для этого сухой препарат был растворен в ацетатном буфере (0.1М, рН 5.0) при перемешивании в течении 20 минут, после чего нерастворимый осадок отделили центрифугированием (12000 g, 5 мин).

Пробоподготовка

Комбикорм былл размолот на лабораторной мельнице и просеян через сито с размером отверстий 0,5 мм. К навескам полученной муки, помещенным в конические колбы, был прибавлен ацетатный буфер (0.1М, рН 5.0). Концентрация сухих веществ в суспензии составляла 200г/л.

Запасной раствор Ровабио был добавлен в аликвоты супернатанта корма так, чтобы концентрация добавленного фермента составляла 0, 30, 60 и 90 мкг/г корма.В качестве нулевой точки использовали суспензию комбикорма, предварительно прокипяченную при 100^оС в течение 20 мин (Табл. 1). 

Колбы были помещены в лабораторный термостатируемый шейкер (40^оС, 250 об/мин), где проводилась экстракция водорастворимых компонентов в течение 3 часов. По окончании процесса, образцы были подвергнуты центрифугированию при 14000 g в течении 20 минут, супернатант был отобран и использован для определения ферментативной активности.

 

Табл.1

1	Нулевая точка, прокипяченная суспензия комбикорма
2	Исходный комбикорм (+ 0 мкг/г Ровабио)
3	Комбикорм + Ровабио 30мкг/г (г/т)
4	Комбикорм + Ровабио 60мкг/г (г/т)
5	Комбикорм + Ровабио 90мкг/г (г/т)

 

Результаты

Результаты спектрофометрического представлены в Табл. 2 и на рис. 1 и 2.

Рис. 1 Определение концентрации по окрашенной КМЦ

Рис. 2 Определение концентрации по окрашенному ксилану

Табл.2

Концентрация ФП в комбикорме по ROD-КМЦ	Концентрация ФП в комбикорме по ROD-ксилану
75+3,5	77+4,7

 

Выводы

Таким образом, можно сделать следующие выводы:

1. Ферментный препарат, обладающий целлюлазной и ксиланазной активностью, был обнаружен в образце комбикорма
2. Было найдено, что концентрация ферментного препарата в комбикорме составляла около 75 г/т